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CMV启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立
CMV启动子 序列检测 PCR方法
2013/11/29
建立和验证用于巨细胞病毒(CMV)启动子序列检测的复合定量PCR方法。方法 以CMV 启动子序列和小鼠管家基因β-actin的cDNA序列为模版分别设计探针和引物,用SYBR GreenⅠ熔解曲线分析两对引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化,并验证检测方法的灵敏度、线性和重复性、以及复合反应效率的变化。结果 针对CMV启动子序列的上游引物为5'AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3',...
实时荧光定量PCR方法应用于药品无菌快速检测的研究
荧光定量PCR 叠氮溴化丙锭 细菌污染 快速检测
2014/2/25
建立应用实时荧光定量PCR进行无菌快速检测的方法。方法 选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌，用裂解试剂盒抽提细菌基因组DNA，进行实时荧光定量PCR检测，并应用叠氮溴化丙锭(PMA)抑制样品中死菌基因组DNA的PCR扩增。结果 PMA能有效去除样品中死菌干扰，针对16S rRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度。在金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌检测中，最低含菌量组与阴性对照组Ct...
应用双重聚合酶链反应（PCR）技术，建立金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的快速检测方法，指导临床及时、合理使用抗菌药物，防止MRSA的扩散。方法 根据金黄色葡萄球菌血浆凝固酶基因Coag和耐药基因mecA设计引物，调整PCR扩增反应各参数，建立快速、准确扩增Coag和mecA基因的双重PCR体系；应用双重PCR对临床分离鉴定的85株金黄色葡萄球菌同时扩增Coag和mecA基因片...
分析多药耐药肺炎克雷伯菌的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因分型，为临床诊断和防治肺炎克雷伯菌感染提供依据。方法 先利用纸片扩散法检测18株临床分离的肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性并获得耐药谱型;再利用ERIC-PCR获得18株肺炎克雷伯菌DNA指纹图谱，通过非加权配对聚类分析(UPGMA)法构建分子进化树;最后探讨肺炎克雷伯菌ERIC-PCR基因型与其耐药性及耐药谱之...
Sequence Analysis of Lysozyme C from the Scorpion Mesobuthus Eupeus Venom Glands Using Semi- Nested RT-PCR
C-type lysozyme Scorpion Mesobuthus eupeus Antimicrobial protein
2015/9/24
Background: Lysozyme is an antimicrobial protein widely distributed among eukaryotes and prokaryotes and take part in protecting microbial infection. Here, we amplified cDNA of MesoLys-C, a c-type lys...
Glutamate dehydrogenase and triose-phosphate-isomerase coding genes for detection and genetic characterization of Giardia lamblia in human feces by PCR and PCR-RFLP*
Giardia lamblia glutamate dehydrogenase triosephosphate isomerase PCR PCR-RFLP
2011/3/22
The purpose of this study was comparison of the glutamate dehydrogenase (gdh) and triose phosphate isomerase (tpi) genes for detection and genetic characterization of Giardia lamblia (G. lamblia) in h...
对金钱白花蛇及其伪、混品药材和原动物的Cyt b基因片段的序列分析发现,该基因片段在金钱白花蛇及其伪品间的差异远远大于金钱白花蛇种内个体间的差异,是理想的用于鉴别金钱白花蛇及其伪混品的分子遗传标记。在对Cyt b基因片段序列分析的基础上,设计了金钱白花蛇PCR鉴别的一对高度特异性引物BuL-1和BuH-1。结果表明,该对引物在对金钱白花蛇的PCR鉴别中,用60℃～65℃的复性温度,可以100%检出...
HIV-1逆转录过程及应用PCR检测
HIV-1 逆转录 聚合酶链反应
2009/11/25
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)作为逆转录病毒，在进入宿主细胞以后其正链RNA基因组就在逆转录酶的作用下开始逆转录合成双链的DNA。HIV-1逆转录的过程大致包括以下几个步骤：负链强力终止DNA的起始合成，负链强力终止DNA的链转移，正链DNA的合成起始，正链强力终止DNA的链转移和最终完整双链DNA的合成。逆转录是HIV-1复制的重要环节，现已...
球花石斛的位点特异性PCR鉴别研究
球花石斛 石斛 位点特异性PCR 鉴别
2009/11/20
为建立球花石斛的DNA分子标记鉴别方法，本文根据测定及GenBank上登录的109种共计164个石斛样本的rDNA ITS序列，设计了特异性鉴别引物QH-JB1 和QH-JB2，并对球花石斛进行了位点特异性PCR鉴别研究。结果表明，当复性条件为63.5 ℃，1 min时，只有球花石斛的模板DNA能被扩增出约300 bp的阳性扩增带，而其他种石斛均为阴性。证明用本法鉴别球花石斛简便、省时，也适用于干...
猪基源的肝素粗品及混淆品的AS-PCR及ARMS分子检测
猪基源肝素钠 mtDNA D-loop区 AS-PCR ARMS 分子鉴别
2009/11/20
本文建立了一种简便、准确的鉴别猪基源的肝素粗品及其混淆品的DNA分子鉴定方法。在对家猪、野猪及其他7种动物(均用于加工猪肝素粗品的混淆品)的mtDNA D-loop区进行序列分析的基础上，设计了专门用于鉴别猪基源肝素钠的AS-PCR(allele-specific PCR)引物及ARMS(amplification refractory mutation system)引物，对家猪、野猪及其他7种...
目的用聚合酶链反应(PCR)评价大蒜素及其与复方磺胺甲基异噁唑(SMZco)伍用治疗小鼠弓形虫病的疗效。方法昆明系小鼠147只,以2×10~4RH株弓形虫速殖子感染后随机分成5组,每组35只。A组和B组为大蒜素与SMZco联合用药组:其中A组两药用至7d后停用SMZco,大蒜素继续用至21d;B组两药用至14d后停用SMZ-co,大蒜素继续用至21d;C组为大蒜素单药组连续用药21d;D组为SMZ...
重叠延伸PCR法克隆重组复合干扰素
重叠延伸PCR法 克隆 重组复合干扰素
2009/2/6
目的: 用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人工优化的干扰素-重组复合干扰素(consensus interferon, cIFN)基因, 用原核表达系统对其进行表达, 鉴定表达的cIFN活性. 方法: 根据大肠杆菌的偏爱密码子, 人工设计cIFN的高表达基因, 用overlap PCR法合成cIFN全基因, 用基因重组技术构建其原核表达载体pRA-cIFN, 在大...
SARS病毒荧光PCR核酸检测试剂盒的研制
试剂盒 SARS病毒 荧光聚合酶链反应
2008/11/25
本项目应用领域为病毒性疾病的早期检测和确证，具体就是SARS病毒核酸的检测。其原理是通过对样品中SARS病毒核酸的检测，确定样品来源是否携带SARS病毒。通过样品检测可以确定病人是否携带SARS病毒，并根据临床特征协助诊断病人是否患有非典型性肺炎。在核酸提取方面，将采用独特的一步法结合探针捕获/磁分离技术。在扩增技术上将采用特异的发夹引物和采用改良分子信标探针，实现一步实时RT-PCR检测双片断。...
短片段引物PCR液相杂交法的建立及检测HBVYMDD的变异的研究
乙肝病毒 YMDD基因 基因扩增 聚合酶链反应
2008/11/18
项目基本内容：探讨乙肝病毒P基因C区变异位点，直接检测拉米夫啶治疗过程中与乙肝病毒耐药有关突变的产生，起着用药监测的重要意义。根据正常的基因序列设计一种可以分辨正常和突变密码子的上下游引物对，将HBV多聚酶基因序列中包括YMDD基因在内的一段65BP长度的DNA片段进行扩增，便可扩增出特异的PCR产物及YI（V）DD突变基因。短片段引物的延伸，每次只须合成40个碱基，减少了PCR反应液中各成分的消...