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GP5Δ84-119稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响
稳定表达 复制 干扰素
2016/2/24
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制，利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒（pPB-GP5Δ84-119），转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆，筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系，并利用cck-8试剂...
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒。以PRRSV LN株为模板，采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段，将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5M，然后将GP3与GP5M双酶切后插入pcDNA3.1（+）构建重组质粒pcDNA3.1GP3GP5M，将其转染COS7细胞。PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1GP3...
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因，将其插入到表达载体pYA3341中，构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550（缺失Asd、Cya、Crp基因），获得重组疫苗菌株X4550（pYA3341-ORF5）。鉴定重组菌GP5蛋白的表达；测...
本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白和猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白的重组杆状病毒BacSCDualORF5E2。该重组病毒带有His6标签，且胞质区域（CTD）和跨膜区域（TM）均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM。对重组病毒进行Western...
猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析
猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 表达 纯化 免疫实验
2009/9/1
［目的］对猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）的GPS蛋白进行纯化与免疫活性分析，为建立相应的血清学诊断方法奠定基础。［方法］
用构建好的重组表达质粒pGEX6P5转化BL21后经IPTG诱导表达。对表达产物进行可溶性分析，再将重组目的蛋白纯化后进行SDSPAGE鉴定和Westernblot分析，最后用重组抗原进行豚鼠免疫试验。［结果］经层析扫描分析目的蛋白含量占菌体蛋白总量30%左右，纯化...
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定。
【目的】探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）自杀性DNA疫苗的免疫效果。【方法】将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游，获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。【结果】Western blot检测证实ORF5和ORF6基因获得正确表达，并且所表达的GP5和M蛋白可以形成异源二聚体。将pSFV-56免疫Balb/c...
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫
猪繁殖与呼吸综合征病毒 DNA重组质粒 细胞因子 免疫反应
2008/8/22
【目的】检测PRRSV GP5 DNA重组质粒在猪体诱导的免疫反应以及细胞因子的佐剂效应。【方法】将表达PRRSV GP5的DNA重组质粒与表达3种细胞因子的重组质粒联合免疫SPF猪，经3次免疫后人工感染PRRSV，检测体液免疫、细胞免疫以及攻毒保护性反应。【结果】重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生中和抗体，效价达1:19.2，并可诱导机体产生较强的细胞免疫，攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率...